 |
|
|
БИОЛОГИЯ ПОЧВ |
Глава 2. УЧАСТИЕ ПОЧВЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ В ЦИКЛАХ ОСНОВНЫХ БИОГЕННЫХ ЭЛЕМЕНТОВ В БИОСФЕРЕ И ПОЧВООБРАЗОВАТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССАХ
|
Смотрите также:
Мейен - Из истории растительных династий
Биографии биологов, почвоведов
|
Образование и окисление метана
Минеральный состав среды для выявления метанобразующих бактерий в почве следующий: NH4C1 — 0,75, КН2РО4—1Д К2НРО4 — 2,0, MgCl2-6H20 — 0,02, СоС12-6Н20- 0,01, NaHC03— 2,0, СаС03 — 2,0, выщелоченный агар — 12, вода водопроводная — 100 мл, вода дистиллированная — 900 мл.
Сульфаты в среду не вводят, чтобы препятствовать развитию суль- фатредуцирующих бактерий. Перед посевом в среду добавляют 1 — 2 мл/л дрожжевого экстракта и 20 мл/л стерилизованной культураль- ной жидкости, полученной при развитии накопительной культуры метаносарцины. Для снижения окислительно-восстановительного потенциала среду кипятят, продувают углекислотой и вносят 4 мл/л 3%-ного раствора Na2S-9H20 в 0,5-ном растворе Na2C03, что соответствует 17 мг/л H2S; рН 7; гН2 около 12. Перед посевом в расплавленную среду вносят источники энергии — кальциевые соли муравьиной, уксусной, молочной кислот или спирты (этанол, метанол) в количестве 1 %.
Существует метод выделения метанобразующих бактерий, в котором в качестве источника энергии используют молекулярный водород. Для засева берут разведения почвенной суспензии в стерильной воде, содержащей 10—20 мг/л H2S. Посевной материал (1 мл) вносят в стерильную пробирку, затем заливают приготовленную среду так, чтобы не оставалось пузырьков воздуха. Время инкубации при 28—30° составляет от 10 дней до нескольких месяцев. О развитии метанообра- зующих бактерий судят по выделению пузырьков газа. Однако газообразование не может служить единственным критерием развития метаногенных бактерий. Для подтверждения присутствия бактерий, образующих метан, необходим газовый анализ. Количественный учет метанобразующих бактерий может быть проведен с помощью метода предельных разведений.
Для получения накопительных культур метанокисляющих бактерий 1ин0кулируют жидкие и агаризованные среды почвенными суспензиями и помещают их в метано-воздушную среду при соответствующей температуре (30, 37, _45, 55, 60°С). Если необходимо выявить весь видовой состав метанокисляющих бактерий, содержащихся в исследуемом образце, то на первом этапе накопительную культуру следует получать на твердой среде.
Последующие этапы выделения накопительной культуры необходимо проводить на жидкой среде следующего состава (г/л): KN03 — 1, КН2Р04 — 0,4, К2НР04 — 0,4, NaCl — 0,3, MgS04-7H20 — 0,3, СаС12 — 0,02, FeCl3 — 0,001. Для приготовления сред используют водопроводную кипяченую фильтровальную и дистиллированную воду 1:1. Фосфорные соли растворяют в дистиллированной воде. Для приготовления твердых сред пользуются очищенным агаром «Дифко» или силикагелем.
Посуду очищают от органических примесей. В качестве источника углерода в среде используют метан. Опыты проводят в колбе, снабженной двумя стеклянными трубками с кранами и резиновой пробкой. В одну из трубок под давлением зводят метан, второй кран в это время открыт для выхода воздуха. Закрывают оба крана, колбу оставляют на 3—4 дня при 30—37°. На поверхности жидкости появляется красноватая пленка метановых бактерий.
Для выращивания метанокисляющих бактерий на твердых средах используют хроматографические сосуды, которые герметизируют при помощи металлической крышки, оборудованной двумя штуцерами, через них вводится и выводится газовая смесь. В сосуды помещают чашки с агаризованкой средой указанного состава, инокулированные почвенной суспензией, и заполняют газовой смесью метан: воздух (1:1 или 1:4). Смену газовой фазы в сосуде осуществляют каждые двое суток. Сосуды помещают в термостат. Спустя 5—10 сут на агаре появляются визуально различимые колонии метанокисляющих бактерий.
Колонии метанокисляющих бактерий получают также при использовании мембранных фильтров. Для этого на агаризованную. среду накладывают фильтры, через которые была предварительно отфильтрована исследуемая проба.
|
|
|
|
К содержанию книги: И. П. БАБЬЕВА, Г. М. ЗЕНОВА, Д.Г.ЗВЯГИНЦЕВ
|
Последние добавления:
Вильямс. Травопольная система земледелия
Качинский - Жизнь и свойства почвы
Вернадский - химическое строение биосферы