Свёртывание крови

В сложных процессах PACK, включающих остановку кровотечения, а также патологическое тромбообразование, важную роль клеточного регулятора системы PACK играют тромбоциты. Они являются универсальными регуляторами в системе PACK на любом участке кровотока.

При воздействии разнообразных соединений  (тромбина, коллагена, ADP, эпинефрина и др.) выявлены характерные последовательные изменения тромбоцитов, которые условно разделяют на несколько стадий. Например: 1) изменение формы — клетки дис-коидной формы превращаются в сферические; 2) слипание тромбоцитов друг с другом — агрегация; 3)  синтез простагландинов и тромбоксанов; 4)  секреция содержимого    из плотных гранул; 5) секреция содержимого из а-гранул [Holmsen H., 1977].    Последние две стадии получили в литературе название реакции высвобождения, которая завершается образованием   и уплотнением сгустка. Некоторые авторы дополнительно включают в эту схему этап ретракции кровяного сгустка

Изучение механизмов, включающихся в остановку кровотечения, изолированно друг от друга встречает большие трудности из-за большой скорости процессов, которые как бы накладываются один на другой, например, агрегация и реакция высвобождения. Различные условия постановки опытов (во взвеси тромбоцитов или в солевых средах после отмывания клеток, что часто бывает необходимым для решения определенных задач) также приводят к получению разнородных данных. Кроме того, отмечается весьма большая вариабельность результатов при исследовании степени активности процессов, протекающих в тромбоцитах, даже в одинаковых условиях опыта. Все эти обстоятельства объясняют известную фрагментарность результатов, полученных в некоторых исследованиях.

В настоящей главе приводятся сведения о некоторых биохимических процессах в тромбоцитах при агрегации и реакции высвобождения, а также возможных механизмах регуляции этих процессов в системе PACK.

Первым ответом тромбоцитов на действие разнообразных индукторов агрегации является изменение формы клеток, которое : происходит за несколько секунд. Кровяные пластинки дисковид-ной формы, циркулирующие в кровяном русле, приобретают сферическую форму, а затем образуют множество коротких отростков и псевдоподий, распластываясь и прилипая к компонентам ба-зальной мембраны (коллагену, микрофибриллам) поврежденного кровеносного сосуда. Этот процесс — адгезия — исследован недостаточно. За последние годы получены экспериментальные данные и высказаны различные соображения о механизме адгезии, имеющей очень важное значение для последующих этапов гемостаза. Адгезия тромбоцитов к нитям коллагена, окружающим поврежденный кровеносный сосуд, отличается от адгезии к стеклу тем, что осуществляется без наличия в среде двухвалентных катионов, фибриногена, фактора VIII, фактора Виллебрандта. Сродство к коллагену является специфическим, и при инкубации с коллаге-назой адгезия не происходит, в то время как другие протеолити-ческие ферменты такого действия не оказывают.

J. Mustard и М. Packham (1970) влияние коллагена на тромбоциты разделяют на 4 стадии: связывание нитей коллагена с клетками — адгезию, индуцирование реакции высвобождения, реакцию высвобождения, в результате которой образуются агрегаты тромбоцитов.

Коллаген непосредственно участвует лишь в первых двух стадиях, причем определяющей фазой является адгезия. В работах последних лет были сделаны попытки объяснить механизм этого процесса. При этом исследователи исходили из особенностей структуры коллагена, представляющего собой «суперспираль», которая состоит из трех цепей: двух одинаковых ai-цепей и одной «2-цепи, входящих в состав тропоколлагена. В состав коллагена входит большое количество глицина, пролина и оксипролина. Углеводная часть его молекулы представляет собой гликозил-галак-тозидные дисахариды, так называемые неполные остатки, связанные с гидроксильной группой б-оксилизина. Одной из характерных особенностей тромбоцитов является наличие в их мембране ферментов, катализирующих перенос глюкозы и галактозы с соответствующих нуклеотидов на рецептор коллагена, которым является неполная углеводная цепочка  (галактозильный остаток).

Исходя из приведенных данных, G. Jamieson (1973), G. Jamie-son, Н. Greenberg, D. Smith (1975) предложили концепцию механизма адгезии тромбоцитов к коллагену. Коллагенглюкозилтранс-фераза и галактозилтрансфераза катализируют перенос глюкозы или галактозы из уридгощифосфатглюкозы или уридилдифосфат-галактозы на рецептор коллагена — неполную углеводную цепочку. При этом образуются комплексы коллаген — трансфераза — тромбоцит, которые при адгезии образуют комплексы между ферментом одного тромбоцита и углеводной частью другого. К данным, подтверждающим эту концепцию,,можно отнести следующее наблюдение. Показано, что ингибиторы, угнетающие адгезию к коллагену (D-глюкозамин, хлорпромазин, ацетилсалициловая кислота) ингибируют активность глюкозилтрансферазы. Аналогичное влияние оказывают гликоцептиды, полученные при обработке коллагена коллагеназой   и последующей   гельфильтрации.

Однако не все приведенные выще результаты были подтверждены или же получили другую трактовку. В частности, ингиби-рующее действие глюкозаминов на адгезию тромбоцитов к коллагену рассматривают как результат нарушения четвертичной структуры молекулы коллагена, поскольку известно, что для осуществления адгезии необходимо сохранение тройной спиральной структуры молекулы коллагена — мономеры коллагена оказывают значительно меньшее влияние.

При исследовании разнообразных воздействий на индуцирование коллагеном агрегации было показано, что блокирование свободных аминогрупп при N-ацетилировании или обработке динит-рофторбензолом приводит к снижению агрегации. Наиболее существенную роль при этом играет сохранение свободной е-амино-группы лизина. Предполагают, что блокирование положительно заряженных аминогрупп в молекуле коллагена является причиной угнетения агрегации тромбоцитов. В то же время ацетилирование свободных карбоксильных групп не влияет на этот процесс, но предотвращает активацию фактора Хагемана. Полагают, что существует зависимость степени адгезии от количества нейрамино -вой кислоты в мембране: при активации тромбоцитов коллагеном, 'тромбином или ADP конечные остатки сиаловой кислоты глико-протеинов мембраны становятся Доступными для действия ней-раминидазы благодаря перераспределению гликопротеинов мембраны [Wu К., Ku S., 1979]. Во всяком случае при пониженном содержании сиаловой кислоты тромбоциты адгезируют с меньшей интенсивностью, что связывают с уменьшением отрицательных зарядов в сиаловых кислотах, находящихся в мембране и необходимых для адгезии.

При выявлении рецепторов для индукторов агрегации R. Has-

lam и М. Lynham (1977) обнаружили включение 3£Р в полипеп

тиды тромбоцитов после обработки их коллагеном. Включение

метки происходило избирательно: с большей интенсивностью в по

липептиды с молекулярной массой 48 000—40 000 дальтон, с мень

шей — в полипептиды с молекулярной массой 25 000 и

19 000 дальтон. Причем включение метки предшествовало агрега

ции, связанной с секрецией содержимого гранул. Характерно, что

фосфорилирование белка не было обнаружено при агрегации

посредством ADP, не сопровождавшейся высвобождением. По

мнению авторов, эти результаты свидетельствуют о необходимости

избирательного фосфорилирования белка для осуществления сек

реции.

Некоторые исследователи отмечают, что адгезия не связана с затратой энергии и существенными изменениями в обмене веществ тромбоцитов.

Тромбин и коллаген являются наиболее сильными ин

дукторами реакции высвобождения и агрегации, причем наиболее

чувствительными к этим агентам оказались тромбоциты человека.

При прилипании кровяных пластинок к коллагену или другим

фрагментам тканей этот тип взаимодействия индуцирует реакцию

высвобождения. В этом случае реакция может происходить без

агрегации, например при наличии этилендиаминтетрауксусной

кислоты. Агрегация осуществляется в присутствии кофакторов,

протекает после фазы замедления, является монофазной, необра-'

тимой и происходит при высвобождении агрегирующего агента —

ADP. После того как наступила агрегация для возбуждения

реакции высвобождения требуется значительно меньше коллаге

на. Поэтому кажется, что выявление реакции высвобождения

наряду с агрегацией в ответ на малые количества коллагена яв

ляется результатом агрегации.

Указанные процессы — адгезия кровяных пластинок к коллагену и последующие стадии — являются необходимыми для образования гемостатического тромба [Packham M., Mustard J., 1977].

Некоторые авторы приводят данные, согласно которым первая стадия реакции высвобождения, индуцируемая коллагеном, не зависит от тромбина, но вторая обусловлена участием этого фермента [Huzor-Akbar, Ardlie N., 1976].

Тромбин является первичным агрегирующим агентом. При применении его в небольших концентрациях агрегация в обогащенной тромбоцитами цитратной плазме обратима, при увеличении количества тромбина — приобретает двухфазный характер и щш этом высвобождаются соединения, находящиеся в плотных гранулах. Дальнейшее повышение концентрации тромбина приводит к секреции из сс-гранул [Holmsen H. et al., 1969]. Таким образом, тромбин индуцирует реакцию высвобождения посредством необратимой агрегации. Непосредственно индуцировать тромбином эту реакцию не удалось, поскольку добавление этого фермента в значительном количестве к обогащенной тромбоцитами цитратной плазме вызывало свертывание плазмы. При проведении опытов с тромбоцитами, ресуспендированными в искусственной среде, можно было наблюдать непосредственную индукцию реакции высвобождения без предшествующей агрегации.

В последние годы проведены многочисленные исследования действия тромбина, играющего столь существенную роль в реакциях гемостаза. D. Aronson (1976) привел доказательства в пользу многостадийное™ действия тромбина по аналогии с механизмом действия протеаз на клетки. Так, действие тромбина начинается с высвобождения из фибриногена пептидов А и В, а затем активного пептида из каталитических субъединиц фактора XIII. За этими этапами следует увеличение активности факторов V и "VIII и в результате этого происходит возбуждение процессов, приводящих к агрегации тромбоцитов и реакции высвобождения.

Весьма существенна роль тромбина в индуцировании фосфори-лирования белков и липидов мембраны, которая участвует в регуляции активности тромбоцитов. Показано, что при воздействии тромбина АТРазная активность миозина, индуцируемая актином, значительно повышается после фосфорилирования миозина [Daniel J., Holmsen H., Adelstein R., 1976]. При этом наблюдалось значительное увеличение включения радиоактивного фосфата в полипептидную цепь с молекулярной массой 20 000 дальтон, которая была идентифицирована как легкая цепь миозина тромбоцитов. Фосфорилированию миозина предшествовала секреция кислой гидролазы, которой сопутствовала секреция адениннуклео-тидов. Эти данные свидетельствуют об участии контрактильного механизма в секреторных процессах кровяных пластинок и его связи с фосфорилированием миозина [Daniel J., Holmsen H., Adelstein R., 1977].

Фосфорилирование субъединицы миозина осуществляется при участии киназы, выделенной из тромбоцитов [Adelstein R. et al., 1978]. Характерно, что дефосфорилирование миозина полностью снимает увеличение сократительной активности миозина, что указывает на возможность такого пути регуляции данного процесса.

При применении других стимуляторов тромбоцитов (коллагена и ионофора А) был обнаружен белок с той же электрофоретиче-ской подвижностью как и у легкой (20 000 дальтон) цепи миозина. Во фракции мембран тромбоцитов найдены также другие ферменты, катализирующие фосфорилирование и дефосфорилирование: диглицеридкиназа, фосфатидилинозинфосфокиназа, неспецифическая фосфомоноэстераза [Kaulen H., Gross R., 1976].

Для выявления акцепторов тромбина в мембране тромбоцитов проводились интенсивные исследования состава и свойств белков.

Они привели к выявлению гликопротеина, чувствительного к тромбину. В опытах, проведенных на изолированных мембранах тромбоцитов, было обнаружено, что после обработки тромбином концентрация белка с молекулярной массой 220 000 дальтон уменьшается и появляется белок с молекулярной массой 80 000 дальтон.

На поверхности кровяных пластинок находятся гликопротеи-ны I, И, III и показана возможность связи тромбина с глико-протеином I как рецептором [Ganguli P., 1977]. Все три гликопротеина оказались гетерогенными. Гликопротеин I содержит по меньшей мере три гликопротеина. Один из них не является мембранным белком, находится во внутриклеточных гранулах и сек-ретируется из тромбоцитов при реакции высвобождения, индуцированной тромбином; другой — гликопротеин 1а — мембранный белок; третий гликопротеин, возможно, также белок мембраны, который легко солюбилизируется при различной обработке кровяных пластинок [Solum N., Nagen I., Cjemdal Т., 1977]. He исключено, что гликопротеин идентичен гликокалицину (гликопротеин Ib), который может служить рецептором и для тромбина, и для ристоцетина [Okumura Т., Jamieson G., 1976].

Специфичность тромбина была подтверждена в исследованиях, проведенных D. Mosher и соавт. (1979), наблюдавших одновременное исчезновение из мембраны гликопротеина с молекулярной массой 68 000—85 000 дальтон и появление гликопротеина с меньшей молекулярной массой, сопровождавшееся изменением формы тромбоцитов, агрегацией и реакцией высвобождения. При обработке тромбоцитов ADP, коллагеном или ионофором кальция А23187 гликопротеин, образующийся из гликопротеина мембраны, в среде не обнаружен.

Многочисленные экспериментальные данные свидетельствуют о том, что рецепторами различных индукторов, активирующих кровяные пластинки, являются гликопротеины мембраны. По-видимому, специфичность этих рецепторов высока, поскольку у больных с врожденными нарушениями функций тромбоцитов найдены изменения в гликопротеинах мембраны.

Вместе с тем результаты, полученные исследователями при выявлении рецептора тромбина, неоднозначны, так как молекулярная масса выделенных гликопротеинов разная.

Агрегация, индуцированная A D P. ADP является наиболее хорошо изученным агрегирующим агентом. Исследованию его влияния на тромбоциты посвящено большое количество работ, что отчасти можно объяснить возможностью использовать хорошо очищенное соединение и применять его в определенных концентрациях.

Агрегация, вызываемая ADP, зависит от величины рН (оптимум при рН 7—8), температуры (оптимум при 37° С) и концентрации ADP. При небольшой концентрации (0,5 мкМ) агрегация в плазме, обогащенной тромбоцитами, протекает по следующим этапам: начальная фаза (изменение формы), агрегация, дезагрегация и возвращение к исходной чувствительности к ADP. При увеличении концентрации ADP агрегация происходит с большой скоростью и носит необратимый характер, причем вторая, заключительная, фаза связана с реакцией высвобождения. Следует отметить зависимость этого процесса от Са2+, необходимого для осуществления второй фазы агрегации. Добавление этого катиона в определенной концентрации при угнетении агрегации этилендиа-минтетрауксусной кислотой или избытком иона цитрата приводит к повышению интенсивности процесса. Однако избыток Са2+ ин-гибирует реакцию, вызванную ADP. Для дезагрегации необходимы Mg2+ ['Mustard J., Pakham M., 1970].

Основной причиной многочисленных исследований ADP-arpera-ции является выделение ADP из тромбоцитов под действием различных индукторов агрегации. В связи с этим было высказано предположение, что агрегация в конечном итоге вызывается ADP независимо от применявшихся агрегирующих агентов.

Гипотеза об универсальной роли ADP в сложном и малоизученном процессе агрегации представлялась весьма заманчивой и явилась причиной концентрации интересов многих исследователей на механизме действия ADP [Сейц И. Ф., 1961; Черняк Н. Б., 1966; Mustard J., Packham M., 1970; Elliot К., Knight J., 1975; McFar-iane D., Mills D., 1975; Mustard J. et al., 1975, и др.]. Одна из наиболее распространенных гипотез базировалась на структурных особенностях нуклеотидов, вызывающих агрегацию: наличие пу-ринового кольца с аминогруппой в положении 6 и пирофосфатной группы. Кроме ADP, агрегацию вызывали З-окси-ADP, 2-хлор-ADP и 2-SH-ADP. Предполагалось, что адениновая часть молекулы ADP связывается с—СО— и — NH-группами белков (возможно, фактора Вйллебрандта) на поверхности тромбоцитов при помощи водородных связей. ADP несет три отрицательных заряда, которые используются для связывания Са2+, имеющего два •положительных заряда. Остающийся отрицательный заряд ADP с Са2+ образует связь — «мостики» — между комплексами тромбоцитов и нуклеотидов, приводя к агрегации. Этот механизм объясняет также агрегацию, вызванную аденозинтетрафосфа-т о м с нечетным количеством зарядов (5 отрицательных зарядов) и отсутствие агрегации при действии AMP и АТР (две и четыре свободные валентности соответственно) [Born G., 1962]. Однако до сих пор механизм действия ADP, возбуждающего агрегацию, окончательно не установлен [Born G., Foulks J., 1977].

Агрегацию, индуцированную ADP, угнетают соединения, близкие по своей структуре: АТР, его аналоги, AMP, аденозин и другие. Это объясняется конкуренцией за место на рецепторе мембраны. Другие соединения — простагландин Ei (PGEi), пиримидо-яиримидиновое соединение РА 233 — угнетают действие ADP посредством увеличения содержания цАМР за счет активирования аденилатциклазы или ингибирования фосфодиэстеразы соответственно. Относительная неэффективность аденозина как ингибитора агрегации является результатом противоположного действия на агрегацию, вызванную ADP: с одной стороны—кнгибирова-ние при активировании аденилатциклазы и увеличении содержания цАМФ, с другой—возможность потребления аденозина. При предотвращении потребления дипиридамолом ингибирующее влияние аденозина увеличивается [Michel H. et al., 1976].

Судя по накопленным экспериментальным данным, представление о том, что ADP является причиной общего пути механизма агрегации, не подтвердилось. Так, при непосредственном определении содержания ADP, вышедшего из тромбоцитов в окружающую среду после агрегации эпинефрином или тромбином, был обнаружен выход ADP лишь при второй фазе агрегации. АТР, специфический антагонист ADP, не ингибирует первую фазу агрегации, вызванную умеренными концентрациями эшгаефрина и тромбина. Это указывает на то, что первичная агрегация происходит по механизмам, независимым от ADP.

Весьма характерно также, что тромбоциты не млекопитающих животных не агрегируют при действии ADP, но агрегация тромбином и серотонином ингибируется аденозином. Это, по-видимому, можно связать с неспецифическим действием аденозина на ADP [Smith J., Macfarlane D., 1974].

Некоторые другие теории базируются на участии в агрегации сократительного белка тромбоцитов тромбостенина. Тромбоциты рассматривают как частный случай контрактильной клетки. В норме при циркуляции в кровяном русле они не адгезивны, так как содержат значительное количество АТР и находятся в состоянии сокращения. Адгезивное состояние тромбоцитов наступает при уменьшении активности контрактилъной системы посредством снижения активности АТРазы при действии экзогенного ADP.

Е. Salzman, D. Chambers и L. Neri (1966) отмечают, что для образования ADP и осуществления агрегации необходима экто-АТРаза мембраны тромбоцитов, близкая по составу тромбосте-нину. Предполагают, что угнетение АТРазы продуктом реакции (ADP) приводит к изменению структуры мембраны и развитию агрегации [Born G., 1972].

По гипотезе F. Boose и М. Rafelson (1972), после расщепления АТР на ADP и неорганический фосфат ири влиянии на тромбоциты физиологического стимула (например, тромбина) значительно увеличивается биосинтез АТР до концентрации, необходимой для расщепления актомиозина на актин и миозин с образованием линейных агрегатов — актин одного тромбоцита соединяется с миозином другого, образуя актомиозиновые «мостики». В присутствии АТР «мостики» способны сокращаться, и происходит сближение тромбоцитов. Эта гипотеза объясняет локализацию тромбостенина на поверхности тромбоцитов, так как ADP не проникает внутрь неповрежденной клетки.

В дополнение к этим представлениям можно отметить, что агрегирующие соединения вызывают аллостерические трансформа-ции тромбостенина, локализованного на поверхности тромбоцитов^ Это приводит к изменению проницаемости мембраны, переходу цитоплазмы тромбоцитов («цитогеля»), содержащей большое количество тромбостенина, в состояние расслабления, взаимодействию многочисленных цитоплазм, выделившихся из других кровяных пластинок, и сокращению при участии Са2+ [Boose F., Ra-felsonM., 1969].

Существует гипотеза об образовании «мостиков» между агрегирующими тромбоцитами с помощью фибриногена ['Born G., 1968], который может участвовать в связывании клеток, осуществляющемся посредством конечной — СООН-группы а-цепи и конечной — ГШг-группы |3-цепи [Bodzynski A., Niewiarowski S.» 1976]. Однако связь тромбоцитов с фибриногеном, по-видимому,, имеет место при начальных изменениях, индуцированных ADP, При добавлении соединений, угнетающих агрегацию, вызванную» ADP (PGEi или аденозина), ассоциация тромбоцитов с фибриногеном не наблюдалась.

Что касается химической природы рецепторов ADP, то можно» указать на роль в агрегации SH-групп, учитывая наблюдавшееся угнетение агрегации N-этилмалеинимидом, п-хлормеркурбен-зоатом и фенилмеркурацетатом. В качестве метки рецелтор-ных мест применяли тиозамещенные ADP [Stone J. et а1.„ 1976].

Предполагают, что в фиксации ADP участвует белок, по свойствам близкий тромбостенину, поскольку преинкубация мембраны тромбоцитов с ингибитором Са2+-, ]\%2+-зависимой АТРазы, мер-салилом, значительно уменьшала количество ADP,  фиксированного на мембране [Legrand С, Caen J., 1976]. Вместе с тем при тромбастении Гланцмана в составе мембраны тромбоцитов обнаружены два    гликопротеина,    отличающиеся    от гликопротеинов мембраны в норме и специфичностью   действия на них антител,, выделенных при указанном заболевании и синдроме Бернара — Сулье {Nurden A., Caen J., 1978; Levy-Toledano S. et al.,    1978]. Это свидетельствует о значении гликопротеинов    мембраны для осуществления важнейших функций тромбоцитов — их агрегации и ретракции кровяного сгустка. Несмотря на то что эти результаты можно рассматривать как предварительные, дальнейшее изучение природы антигенной детерминанты мембраны,    включающейся во взаимодействие со специфическим антителом, вызывает большой интерес.

Таким образом, на основании накопившихся данных литературы можно сделать заключение о нахождении в мембране тромбоцитов специфических рецепторов для соединений, индуцирующих агрегацию. Однако природа рецепторов исследована недостаточно,. ж каждый агрегирующий агент имеет характерные особенности, изученные также недостаточно.

Участие простагландинов в агрегаций тромбоцитов. При действии веществ, возбуждающих агрегацию тромбоцитов, происходит биосинтез PGE2 и PGF2 , предшественником которых является арахидоновая кислота. В кровяных пластинках содержится значительное количество этого соединения, входящего в состав фосфолипидов мембраны (фосфатидилхолина, фосфатидилинозита), в связи с чем синтез простагландинов происходит без добавления предшественников. Переход арахидоновой кислоты фосфолипидов мембраны тромбоцитов в быстро используемые фосфолипиды внутренней поверхности мембраны под влиянием тромбина наблюдался в опытах с моченной 14С или 3Н арахидоновой кислотой [Bills Т., Smith J., Silver M., 1976; Rittenhouse-Simmons S., Russel F., Deykin D., 1976].

Содержание свободной арахидоновой кислоты в плазме невелико, а в тромбоцитах она практически отсутствует. Добавление ее к обогащенной тромбоцитами плазме приводит не только к синтезу простагландинов, но также к агрегации и реакции высвобождения. Другие С20-карбоксильные кислоты не оказывают такого влияния. Некоторые ненасыщенные жирные кислоты, напротив, оказались эффективными ингибиторами агрегации, индуцированной арахидоновой кислотой. На основании этого можно предположить, что происходит конкуренция за рецептор на поверхности тромбоцитов или за фермент.

Выделение арахидоновой кислоты из фосфолипидов тромбоцитов осуществляется с помощью фосфолипазы Аг. Дальнейшие превращения арахидоновой кислоты с образованием циклических эндопероксидов, PGGb и PGH2, происходят при участии проста-гландинсинтетазы, которая, возможно, является комплексом фер^ ментов, включающим в себя циклооксигеназу. Фермент ингиби-руется ацетилсалициловой кислотой и индометацином [Ham-berg М., Samuelsson В., 1974].

PGG2 и PGH2 в свою очередь при действии тромбоксаисинтета-зы превращаются в нестойкие промежуточные продукты — тром-боксан Аг, а затем в тромбоксан Вг и малоновый дильдегид.

Нестабильные промежуточные продукты этого пути превращений, обозначаемого в литературе как путь арахидоновой кислоты, PGG2 и PGH2, также как и тромбоксан Аг, индуцируют агрегацию и реакцию высвобождения [Bills Т., Smith J., Silver M., 1978].

Биосинтез простагландинов осуществляется при участии лабильных промежуточных продуктов, одним из которых является LASS (лабильное агрегирующее стимулирующее вещество), которое синтезируется с большой скоростью (30—60 с), под влиянием коллагена или тромбина после добавления арахидоновой кислоты. В небольшой концентрации LASS вызывает обратимую агрегацию без реакции высвобождения, в более высоких концентрациях — необратимую агрегацию и реакцию высвобождения, регистрируемую по выходу серотонина. Действие LASS заметно усиливается под влиянием PGE2, a PGEi и теофиллин ингибируют действие этого соединения.

В фосфолипидах мембраны тромбоцитов, кроме арахидоновой кислоты, содержится значительное количество линолевой и олеиновой кислот, поэтому можно было предположить, что они будут высвобождаться наряду с арахидоновой кислотой и лимитировать образование простагландинов и тромбоксанов. Однако показано, что активная фосфолипаза А2 в тромбоцитах человека избирательно высвобождает арахидоновую кислоту, и указанные жирные кислоты не играют регулирующей роли в превращениях арахидоновой кислоты. По-видимому, фосфолипаза А2 является ключевым ферментом при превращениях арахидоновой кислоты и этот этап является пусковым в образовании простагландинов и тромбоксанов.

Для проявления активности фосфолипазы Аг необходим Са2+. Предполагают, что стимуляция фермента осуществляется при действии тромбина и мобилизации Са2+ из внутриклеточных резервов, а также ADP, эшшефрина после предварительной стадии агрегации и внеклеточного кальция.

Возможно, что механизм влияния промежуточных продуктов простагландинов заключается в стимулировании движения Са2+ в цитоплазму. Во всяком случае при воздействии их на тромбоциты изменяется форма клетки и происходит реакция высвобождения. Наряду с этим обнаружено, что в плотной тубулярной системе, где накапливается Са2+, происходит и синтез простагландинов [White G., Gerrard J., 1976].

Первичное молекулярное действие простагландинов извне заключается в изменении концентрации внутриклеточного цАМР; цАМР образуется из АТР при участии аденилатциклазы и расщепляется фосфодиэстеразой с образованием 5'-АМР. Таким образом, содержание цАМР контролируется этими двумя ферментами, находящимися в мембране, посредством четырех механизмов: активирования и ингибирования аденилатциклазы и фосфодиэстеразы соответственно. PGEi стимулирует аденилатцик-лазу, увеличивая содержание цАМР и угнетая агрегацию, вызванную ADP. PGE2, напротив, ингибирует этот фермент и повышает интенсивность агрегации при применении в таких же концентрациях, как и PGEi.

В механизме действия простагландинов и их промежуточных продуктов, по-видимому, не участвует ADP, поскольку при наличии системы креатинфосфаткиназа креатинфосфат, превращающей ADP в АТР, не обнаружено влияния простагландинов на агрегацию.

Для образования простагландинов из арахидоновой кислоты требуется энергия. Наблюдавшееся увеличение потребления кислорода при действии тромбина на тромбоциты, «взрыв потребления кислорода», по-видимому, связано с окислением арахидоновой кислоты до простагландинов [Bressler et al., 1979] и образованием АТР путем окислительного фосфорилирования [Muenzer J.r Weinbach E., Wolfe S., 1975].

Наряду с агрегирующим действием простагландинов на тромбоциты выявлено и обратное действие — ингибирование агрегации простациклином (PGI2), образующегося в сосудистой стенке. Это соединение является промежуточным продуктом превращений эндопероксидов простагландинов в стабильный конечный продукт — б-кето-PGFi . Угнетающее влияние простациклина выявлено при действии экстрактов микросомальной фракции сосудистой стенки на плазму, обогащенную тромбоцитами, при добавлении арахидоновой кислоты. Оно может рассматриваться как механизм, предотвращающий скопление тромбоцитов на субэндотелии.

Показано, что PGI2 и в меньшей степени PGEi ингибируют первую стадию гемостаза и тромбоза — адгезию к компонентам субэндотелия и коллагену и в результате этого — агрегацию тромбоцитов, причем оба соединения не ингибируют реакцию высвобождения серотонина из кровяных пластинок, прилипших к коллагену [Cazenave J. P. et al., 1979]. Возможно, что PGEi и PGIz действуют по одному механизму, в результате чего увеличивается содержание цАМР [Weiss H., Turitti N., 1979].

Участие Са2+ и цАМР^з а в и с и м о й протеи нкина-I.И зы тромбоцитов в агрегации и реакции высвобождения. В последние годы установлено, что Са2+ играют ключевую роль в функциональной активности тромбоцитов.

Существует ряд доказательств в пользу этого положения — прежде всего аналогия с другими клетками, для которых известно, что Са2+ является возбудителем секреции и сокращения. К непрямым доказательствам относится известный факт, что адгезия и секретирование содержимого гранул тромбоцитов индуцируются катионным ионофором А23187, причем ответ на действие этого-соединения такой же, как и при действии других стимулов. И, наконец, к прямым доказательствам можно отнести блокирование лекарственными средствами (некоторыми локальными ане-стетитиками) функциональной активности кровяных пластинок нардду с ингибированием высвобождения Са2+ из саркоплазмати-ческого ретикулума. Несмотря на то что это окончательно экспериментально не доказано, предполагают, что в регуляции функций тромбоцитов основную роль играют внутриклеточные ресурсы Са2+ [Detwiller Т., Charo I., Feinman R., 1978].

При увеличении концентрации Са2+ в цитоплазме высвобождается Са2+ из мембраны, что приводит к быстрому изменению формы тромбоцитов, затем везикулярные органеллы выделяют Са2+ в цитоплазму и индуцируют реакцию высвобождения, причем происходят секреция Са2+ в окружающую среду и изменения в плазматической мембране, которые выражаются в увеличении проницаемости для Са2+.

При высвобождении Са2+ из плотных гранул мембрана этих органелл соединяется с плазматической мембраной или с мембраной канальцевой системы, связанной с поверхностью клетки, которая, сокращаясь, выталкивает Са2+ и некоторые другие соединения в цитоплазму [Massini P., Kaser-Glanzmann R., Luscher E., 1978].

В связи с тем что регуляция уровня Са2+ обеспечивает кон-трактильное состояние клетки, активность сократительного механизма, необходимого для агрегации, реакции высвобождения, ретракции кровяного сгустка, было проведено большое число исследований с целью выявления рецепторов для Са2+ в тромбоцитах. К весьма существенным результатам этих исследований следует отнести выделение из лизатов тромбоцитов четырех белков (меченных \-32Р-АТР), связывающих Са2+ (молекулярная масса 50000, 28 000, 15 000 и 11000 дальтон). Наибольшее включение метки обнаружено во фракции белка с молекулярной массой 11000 дальтон, причем только этот белок из четырех рецепторов метился 32Р в неповрежденных тромбоцитах. Он локализован на поверхности клетки и связывает 1 моль Са2+ на 1 моль фосфори-лированного белка.

Фосфорилирование рецептора осуществляется при участии протеинкиназы, зависимой от цАМР, основная роль которого в тромбоцитах, как и других системах эукариотов, заключается в фос-форилировании специфических белковых субстратов. Включение 32Р в рецепторы коррелирует с содержанием цАМР, наибольшее включение обнаружено также во фракции белка с молекулярной массой 11000 дальтон [Steiner H., 1975]. В дальнейших исследованиях было установлено, что в кровяных пластинках содержатся две зависимые от цАМР протеинкиназы — растворимая и связанная с мембраной, однако физиологические субстраты этого •фермента до сих пор окончательно не идентифицированы [Has-lam R. et al., 1978]. Во всяком случае оказалось, что при дефос-форилировании рецепторов их способность к связыванию Са£+ утрачивается. Это подтверждает предположение о регуляции участия Са2+ в механизме сокращения контрактильного белка тромбоцитов фосфорилированным белком [Boose F., Marr J., Mom-linson D. et al., 1975]. Обнаружено также, что цАМР увеличивает поглощение Са2+ везикулярной мембраной тромбоцитов. Активный транспорт Са2+ осуществляется, возможно, с помощью фос-форилированного полипептида с молекулярной массой 22 000 дальтон, который, как предполагают, является легкой фракцией миозина.

Процесс дефосфорилирования рецепторов для Са2+ исследован недостаточно. Boose F., Магг Y., Yang £>., и соавт. (1975) предполагают, что происходит перенос фосфатной группы с фосфори-лированного эндогенного рецептора, белка с молекулярной массой 11000 дальтон, на экзогенный рецептор — соединение, вызывающее агрегацию. Учитывая включение   неорганического   меченого 32Р, специфичность киназы и термодинамическую предпосылку— перенос фосфатной группы от бедного энергией соеди* нения на экзогенный рецептор, например ADP, возможен следующий механизм. Экзогенный рецептор связывается с кина-зой и фосфорилируется за счет АТР — обычного субстрата кина-. зы. При этом за фосфорилирование конкурируют экзо- и эндогенный рецепторы. Участие в этом процессе фосфатазы приводит к дефосфорилированию эндогенного рецептора (о чем судят по появлению метки), после чего начинается поступление Са2+ в клетку.

Ограниченное поступление Са2+ в тромбоциты, согласно данным F. Boose, J. Магг, D. Yang (1975), объясняется тем, что фосфо-. протеин, связывающий Са2+, может быть составной частью Са2+-насоса, который нужен для поддержания низкого уровня внутриклеточного Са2+. Выпадение этой функции при дефосфори-лировании белка приведет к неконтролируемому поступлению Са2+ в клетку, началу агрегации и реакции высвобождения. С другой стороны, Са2+ необходим также для поддержания сократительного белка в контрактильном состоянии, и уменьшение содержания Са2+ сопровождается «расслаблением» белка, увеличением проницаемости мембраны и, как следствие, поступлением Са2+ в клетку.

Таким образом, механизм действия цАМР, по-видимому, связан со специфической протеинкиназой, осуществляющей фосфорили-рование белка, который является рецептором для Са2+ в тромбоцитах.

Следует подчеркнуть, что некоторые соединения, индуцирующие агрегацию (ADP, коллаген, тромбин, адреналин), ингибиру-ют аденилатциклазу, вследствие чего снижается внутриклеточный уровень цАМР. Напротив, ингибиторы агрегации тромбоцитов (аденозин, PGEi) приводят к повышению содержания внутриклеточного цАМР. Аналогичный результат получают при угнетении фосфодиэстеразы дипиридамолом, папаверином, кофеином, РА 233. Приведенные выше данные об участии цАМР-зависимой протеинкиназы в образовании рецепторов для Са2+ использованы для разработки концепции о механизме агрегации тромбоцитов, которая укладывается в следующую схему.

1. Аденилатциклаза катализирует образование цАМР из АТР. 2. Активируется протеинкиназа цАМР. 3. При участии цАМР-зависимой лротеинкиназы фосфорилируется эндогенный рецептор Са2+. 4. Са2+ связывается фосфорилированным рецептором. 5. Осуществляются ингибирование аденилатциклазы и фосфорилирование рецептора Са2+ с помощью ADP, тромбина и коллагена. 6. В результате нарушается связывание Са2+, которые входят в тромбоциты и используются клетками для осуществления сократительного механизма — агрегации.

Реакцией высвобождения называется избирательное выделение из агрегированных тромбоцитов некоторых соединений, находящихся в гранулах, при сохранении целостности клетки. Характерно, что секреция содержимого гранул в плазму не сопровождается лизисом клетки, при котором разрушаются мембраны и органеллы вместе со своим содержимым выходят в окружающую среду. При реакции высвобождения гранулы выбрасывают свое содержимое при помощи сокращения микротубулярной системы, связанной с поверхностью клетки, причем тромбоциты сохраняют целостность или во всяком случае способность к выполнению своих функций.

Условно реакцию высвобождения разделяют на несколько стадий: индукцию — влияние различных   соединений    (коллагена, тромбина, ADP и др.) на мембрану, стимулирующих ее и приводящих к освобождению Са2+ из мембраны, и трансмиссию — проникновение Са2+ в клетку. Наряду с этим отмечается уменьшение активности аденилатциклазы и соответственно содержания цАМР, что в свою очередь индуцирует образование «адгезивных» тромбоцитов. Концентрацрш цАМР может снижаться и при увеличении активности фосфодиэстеразы, расщепляющей предобразованный цАМР. Заключительной фазой реакции высвобождения является    секреция,    которая     протекает     в    два    этапа:    выход содержимого из плотных телец  (главным    образом    серотонина, ADP, Са2+)  и секреция из а-гранул    тромбоцитов,   АТР, фактора 4, способного присоединять    и   нейтрализовать гепарин, фактора   III,   катализирующего   конечную   стадию   свертывания — образование фибрина, а также секреция Са2+, липидов и некоторых гидролаз в следовых количествах. В а-гранулах тромбоцитов человека обнаружен также  фактор роста соединительной ткани, Р-тромбоглобулин   [Fukomi M., Salganicoff L.,   1977;   Kaplan D., et al., 1979]. Высвобождающиеся ADP и серотонин индуцируют изменение формы тромбоцитов и последующую агрегацию и реакцию  высвобождения.     Ферменты,  находящиеся  в  цитоплазме, митохондриях и мембране, клеткой удерживаются.

Весьма существенным было обнаружение в тромбоцитах двух резервов адениловых нуклеотидов [Holmsen И., 1973]. В один из них, «метаболический», включается радиоактивная метка пред-шественников (аденозин, аденин); он участвует в обмене веществ, и при реакции высвобождения почти вся радиоактивная метка сохраняется в клетке. Другая часть адениловых нуклеотидов обособлена в плотных гранулах, выбрасывается клеткой при реакции высвобождения, не включает радиоактивную метку, ее содержание можно определить с помощью лишь химических методов. Таким образом, АТР и ADP, находящиеся в плотных гранулах, практически не вступают в реакции обмена с адениловыми иуклеотидами, участвующими в метаболических процессах. Эта резервная часть нуклеотидов сосредоточена в гранулах вместе с серотонином и Са2+, которые также выделяются при реакции высвобождения. Большая часть АТР и ADP (2/3) обособлена в «неметаболическом резерве», соотношение ATP/ADP равно 0,9. 52

В метаболическом резерве АТР и ADP составляют соответственно 7з их общего количества при соотношении ATP/ADP, равном 5—8.

Содержание АТР в тромбоцитах до выполнения функций — относительно постоянная величина, на определенном уровне она поддерживается за счет как интенсивного гликолиза [Черняк Н. В., 1966, Сейц И. Ф., Луганова И. С, 1967; Akkerman Y., 1978; Karpatkin S., 1967; Chernyak N., 1965], так и окислительного фосфорилирования [Черняк Н. Б. и др., 1973; Fukami M., Salganicoff L., 1973]. Образующаяся при этих процессах энергия аккумулируется в пирофосфатных связях АТР и расходуется на синтез фосфолипидов, некоторых белков, образование цАМР, как субстрат АТРазной реакции, а также на сохранение формы и поддержание состояния функциональной активности тромбоцитов.

При осуществлении реакции высвобождения затрачивается энергия, получаемая при использовании метаболического резерва АТР. Некоторая часть этого АТР разлагается до инозина и гипоксантина (схема 2): если в 10й тромбоцитов мкмоль АТР превращается в гипоксантин, то в том же количестве тромбоцитов 20—100 мкмоль АТР идет на образование лактата [Holmsen H., Day II., 1971]. Наряду с распадом метаболического резерва АТР при реакции высвобождения выбрасывается запасная часть адениловых нуклеотидов.

В отличие от реакции высвобождения агрегация происходит без видимого расщепления АТР, однако при блокировании биосинтеза АТР агрегация нарушается. Это свидетельствует о том, что для осуществления данного процесса также необходима затрата энергии. При агрегации наблюдаются увеличение потребления глюкозы и накопления лактата, уменьшение содержания гликогена, повышение декарбоксилирования глюкозы и резкое увеличение потребления кислорода. АТР, нарабатывающийся при процессах обмена энергии, компенсирует его расход. Снижение уровня АТР можно обнаружить только при одновременном добавлении дезоксиглюкозы, ингибирующей гликолиз, и олигомици-на, ингибитора транспорта электронов и окислительного фосфорилирования, поскольку регенерация АТР, как отмечено выше, происходит весьма эффективно [Holmsen H., Day H., 1971; Holmsen Н., 1973, 1974; Kattlove H., 1974].

Следует также подчеркнуть, что полное расщепление метаболического резерва АТР при воздействии на тромбоциты NaF и антимицина осуществляется только при реакции высвобождения, когда образуются инозин и гипоксантин; последнее может служить индикатором реакции.

Между отдельными стадиями реакции (изменение формы тромбоцитов, агрегация, реакция высвобождения) и содержанием АТР существует тесная корреляция [Holmsen H., 1974]. Так, наименьшее потребление АТР происходит при изменении формы клетки, увеличение потребления — при агрегации и реакции    высвобождения — с 20 и 60% до 85% соответственно от общего количества АТР, находящегося в клетке [ Cohen I. et al., 1975].

Н. Holmsen (1971) выдвинул концепцию, согласно которой последовательность ответов кровяных пластинок на действие индуктора выглядит следующим образом: 1) изменение формы клетки; 2) агрегация; 3) синтез простагландинов, эндопероксидов и тромбоксана; 4) секреция плотных гранул; 5) секреция а-гранул. Такая последовательность является результатом увеличения интенсивности ответа на стимул, вызвавший агрегацию.

Сила индуктора определяется ответом на одну из последовательных реакций. Так, ADP более слабый индуктор, чем тромбин, поскольку под действием ADP изменяется форма клетки, происходят агрегация и высвобождение арахидоновой кислоты, а тромбин индуцирует ответ на все последовательные реакции. Степень воздействия ADP может быть различной: если синтез простагланди-нов и тромбоксана ингибирован, то влияние ADP ограничивается двумя первыми реакциями. В то же время серотонин обладает менее выраженным действием, чем ADP, так как вызывает лишь изменение формы клетки и обратимую агрегацию. Лишь два агента — тромбин и коллаген — приводят к секреции веществ из а-гранул и осуществляют «основную реакцию тромбоцитов»

Последовательность ответов тромбоцитов на действие всех индукторов одинаковая. Различие заключается в количестве последовательных реакций, а также в соответственном увеличении потребления АТР.

Предполагают, что каждый индуктор взаимодействует с определенным рецептором на поверхности мембраны, а это приводит к высвобождению из мембраны другого, общего индуктора — Са2+ в цитоплазму. В результате происходит возбуждение последовательных реакций, причем проявление их не является цепью реакций, в которых один ответ приводит в действие следующий. Напротив, возможно, что каждый ответ независим от другого и механизм их различен. Следствием такого предположения является мнение о том, что индивидуальные ответы могут быть обходными, несмотря на наличие общего второго индуктора. Вероятно, PGG2 и PGH2, а также тромбоксан Аг, непосредственно индуцируют секрецию из плотных гранул и выделяющийся ADP вызывает затем изменение формы тромбоцитов и агрегацию.

ADP и в меньшей степени серотонин являются типичными по^ тенциальными индукторами реакции высвобождения, так как после выхода в окружающую среду из плотных гранул эти соеди-нения -могут взаимодействовать с рецепторами на поверхности тромбоцита и увеличивать суммарный стимул тромбоцитов. Высвобождение арахидоновой кислоты также приводит к увеличению стимулов. Повышение интенсивности реакции высвобождения включает механизмы положительной обратной связи. Так, при выделении арахидоновой кислоты и образовании простагландинов и тромбоксанов отмечается воздействие их на рецепторы мембраны и увеличение общих стимулов — положительная петля обратной связи. Аналогичная картина наблюдается при секреции из плотных гранул ADP и серотонина.

Следует также отметить, что агенты,  активирующие    тромбоциты, могут действовать кооперативно: ADP стимулирует влияние адреналина, серотонина, арахидоновая    кислота — ADP и т. д. Возможно, что синергизм проявляется во время фазы индукции при взаимодействии индукторов реакции с рецепторами.

Реакцию высвобождения, вызванную агрегацией, можно предотвратить лекарственными средствами, ингибирующими первую фазу агрегации (аденозин или PGEi). Некоторые классы соединений подавляют вторую необратимую фазу агрегации без выраженного влияния на первичную агрегацию, что может быть связано с ингибированием реакции высвобождения. К этим ингибиторам относятся некоторые антидепрессанты, антигистаминные препараты, локальные анестетики. Для проявления указанного влияния концентрация этих соединений должна, быть больше, чем при применении в терапевтических целях. Наиболее исследованная в этом плане группа лекарственных средств — нестероидные противовоспалительные агенты, включающие ацетилсалициловую кислоту и индометацин.

Известно, что ацетилсалициловая кислота ингибирует вторую фазу агрегации, вызванную ADP, эпинефрином или тромбином, и не влияет на первую фазу, даже в больших концентрациях. Это соединение угнетает агрегацию, индуцированную коллагеном посредством ингибирования высвобождения эндогенного ADP. Показано также, что ацетилсалициловая кислота предотвращает высвобождение АТР, серотонина и IV фактора кровяных пластинок. Это свидетельствует о том, что данное вещество угнетает высвобождение, тем самым снижая агрегацию, индуцированную-коллагеном и вторую фазу агрегации, индуцированную ADP и эпинефрином [Weiss H., 1976].

Механизм действия на агрегацию ацетилсалициловой кислоты изучен недостаточно. Получены данные о ее влиянии на белки мембраны (ацетилирование), приводятся доказательства в пользу ингибирования этой кислотой образования лабильных эндоперекисей, простагландинов, которые могут участвовать в реакции высвобождения. Индометацин и некоторые другие нестероидные противовоспалительные средства также ингибируют синтез простагландинов в тромбоцитах. Дипиридамол, пиримидо-пиримиди-новое соединение, обладающее сосудорасширяющими свойствами, •снижает активность фосфодиэстеразы, расщепляющей цАМР, а также уменьшает потребление глюкозы и аденозина. Другие соединения этого ряда (РА-233, РА-433 и др.) являются более сильными ингибиторами агрегации, чем дипиридамол. К сильным ингибиторам адгезии относится декстран.

Детальное изучение механизма действия разнообразных классов соединений, которые могут включаться в регуляцию отдельных этапов гемостаза, необходимо для их дальнейшего использования в клинической практике.

Возможные механизмы регуляции агрегации и реакции высвобождения. Агрегация тромбоцитов индуцируется разнообразными агентами: ADP, тромбином, коллагеном, адреналином, серотонином и др. Образование агрегатов связано с характерными особенностями агрегирующих агентов и специфическими рецепторами тромбоцитов, природа которых изучена недостаточно. Известно, что в агрегации большую роль играет взаимодействие соединений, возбуждающих агрегацию с гликопротеинами мембраны тромбоцитов.

Реакция высвобождения наступает в зависимости от соединений, участвующих в процессе, после агрегации, или минуя эту стадию.

В тромбоцитах находятся два резерва адениловых нуклеоти-дов, локализованных в различных частях клетки: «метаболический» участвует в процессах обмена энергии (гликолизе, окислительном фосфорилировании), «резервный» — часть адениловых нуклеотидов клетка выбрасывает при реакции высвобождения, этот запас практически не вступает в реакцию обмена веществ.

Для осуществления агрегации и реакции высвобождения необходима затрата энергии. Агрегация происходит без видимого распада АТР, за счет возмещения утилизации этого нуклеотида ре-синтезом. Однако при истощении запаса АТР или ингибировании гликолиза и окислительного фосфорилирования интенсивность агрегации снижается и этот процесс затем прекращается. Для реакции высвобождения требуются большие затраты энергии, чем при агрегации. Высвобождение содержимого гранул происходит при использовании энергии расщепления «метаболического» АТР.

Таким образом, для нормального тромбообразования в системе PACK необходимо поддержание на определенном уровне процессов обмена энергии в тромбоцитах.

При действии соединений, возбуждающих агрегацию тромбоцитов и реакцию высвобождения, происходит синтез простагландинов, предшественником которых является арахидоновая кислота. Возможным механизмом является активация фосфолипазы

Аг, катализирующей выделение арахидоновой кислоты из фосфо-липидов мембраны тромбоцитов. При воздействии комплекса ферментов, в состав которого входит циклооксигеназа, происходит превращение арахидоновой кислоты в циклические эндоперокси-ды — PGG2 и PGH2. Эти соединения в свою очередь при участии тромбоксан-синтетазы образуют нестойкий тромбоксан Аг, также вызывающий  агрегацию и реакцию высвобождения.

Фосфолипаза А2 является ключевым ферментом превращений арахидоновой кислоты, предшественника простагландинов. При угнетении фермента ацетилсалициловой кислотой или индомета-цином предотвращается выделение арахидоновой кислоты из фос-фолипидов тромбоцитов и этот путь выключается. Превращения арахидоновой кислоты могут блокироваться и на другой, более поздней стадии — ингибированием циклооксигеназы, катализирующей образование PGG2 и PGH2.

Показано, что в интиме и других слоях сосудистой стенки образуется сильный ингибитор агрегации тромбоцитов — проста-циклин (PGIi). Механизм его действия (также как и PGEi) заключается, по-видимому, в увеличении содержания внутриклеточного цАМР, угнетении фосфолипазы Аг и агрегации. Интенсив-' ность действия PGIi более высокая чем PGEi, еще более сильное действие оказывает PGF2.

Таким образом, соединения, образующиеся при превращении арахидоновой кислоты, приводят не только к образованию гемо-статических тромбов, но и препятствуют формированию и развитию последних.

Регуляция интенсивности агрегации и реакции высвобождения тромбоцитов связана также с уровнем цАМР. Увеличение содержания этого циклического нуклеотида при действии PGEi и PGD2, активирующих аденилатциклазу, приводит к снижению-интенсивности агрегации. Наоборот, уменьшение концентрации цАМР при снижении активности аденилатциклазы или увеличении активности фосфодиэстеразы, расщепляющей цАМР, вызывает усиление агрегации тромбоцитов.

Итак, первичное действие простагландинов заключается в изменении концентрации внутриклеточного цАМР. Возможный механизм действия этого нуклеотида связан со специфической проте-инкиназой, осуществляющей фосфорилирование белка — рецептора Са2+ в тромбоцитах.

Предполагают, что цАМР-зависимая протеинкиназа осуществляет фосфорилирование эндогенного рецептора Са2+. При дефос-форилировании рецептора в результате переноса фосфатной груп~ пы на экзогенный рецептор — на соединение, вызывающее агрегацию, способность к связыванию Са2+ утрачивается и начинается поступление этих ионов в клетку. Одновременное действие сое-* динений, индуцирующих агрегацию и ингибирующих аденилатки-» назу, сопровождается агрегацией тромбоцитов и реакцией высвобождения. Таким образом, регуляция уровня Са2+ обеспечивает контрактильное состояние клетки, высокую активность сократительного механизма.

Следует также отметить, что изменение    формы тромбоцитов, агрегация и реакция высвобождения содержимого    гранул   хра-нения и высвобождение содержимого лизосомальных гранул являются ответом    на стимул    агрегации.    Слабые    агрегирующие агенты или небольшие концентрации сильных агентов вызывают лишь первую ступень последовательных реакций, в то время как сильные индуцирующие соединения приводят    в действие последующие реакции гемостаза и эффективность    их увеличивается при выделении из тромбоцитов соединений, вызывающих агрегацию. Хотя рецепторы для различных индукторов агрегации могут . быть различными, ответ тромбоцитов  на действие    соединений, вызывающих агрегацию,    включает    в себя перемещение    Са2+ . внутрь клетки.

Исследования и расшифровка сложных биохимических процессов, приводящих к тромбообразованию, позволят разработать методы для целенаправленной коррекции отдельных звеньев системы PACK. Среди этих методов ведущую роль играют трансфузии взвеси тромбоцитов доноров больным с нарушением функции тромбоцитарного звена системы PACK, а также ингибирование функции тромбоцитов больного с помощью различных медикаментозных средств.