|
Определение антагонистической
активности бифидобактерии.
Антагонистическую активность бифидобактерий определяют
методом совместного выращивания на жидких средах с тест-штаммами с
последующим высевом на . плотные среды. В качестве тест-штаммов берут 8
штаммов: Ё. coli, S. aureus, Pr. vulgaris, Ps. inirabilis, Kl. pheumonia, Sh.
flexneri, Sh. sonnei, Salmon yphimurium.
Тест-штаммы выращивают на скошенном мясопептонном агаре в
течение 18—20 ч, затем смывают стерильным физиологическим раствором и. по
оптическому стандарту мутности готовят микробную взвесь, соответствующую 10
ед. по стандарту мутности. Из 16—24- часовой культуры бифидобактерий, выращенной
на кукурузно-лак- тозной среде, готовят такую же взврсь.
Приготовленные стандартные взвеси каждого штамма
бифидобактерий и тест-культур вносят по 1 мл в пробирки с казеиново-
дрожжевой средой № 5 или кукурузно-лактозной средой, разлйтой по 9 мл. Контролем
служит то же количество микробной взвеси каждого тест-штамма, внесенного в
выше названные среды. Посевы инкубируют при 37—38°С в течение 48 ч.,
После двухсуточного выращивания из посевов смешанных
культур и контрольных делают десятикратные разведения в физиологическом
растворе. Из разведений Ю-5, 10~6 и Ю-7 контрольных посевов и из разведений
Ш-3, 10~4, Ю-5 опытных высевают по 0,1 мл суспензии на чашки со средой Эидо
для учета энтеробактеркй и с мясопептонным агаром—для стафилококков. Кайлю
микробной, взвеси равномерно растирают шпателем по поверхности агар'а и
инкубируют при температуре 37± 1°С в течение 24 ч. '
Для оценки степени антагонистического действия
бифидобактерий на тест-штаммы подсчитывают колонии тест-микробов, выросших на
плотных питательных средах после совместного культивирования с
бифидобактериями и в монокультуре. Количество колоний тест; штамма, выросших
в монокультуре, принимают за 100%. Вычисляют процент выживших клеток
тест-культур в смешанных посевах по сравнению с контролем. Он не должен
превышать 1—2%.
Определение ферментативной активности (сбраживания
углеводов) бифидобактерий. Определение сбраживания углеводов производят
следующим образом. Суточную культуру штамма бифидобактерий, выращенную в
жидкой питательной среде (Гисса), разводят до 10~4 в физиологическом
растворе.
Микробную взвесь, из указанного разведения вносят по 0,1
мл в пробирки со средой, содержащей углеводы, и в контрольную без углеводов.
Посевы инкубируют при температуре 37±1°С в течение 14 сут и просматривают на
3, 5, 7, 10 и 14-е сутки. Реакцию считают положительной, если при наличии
роста в пробирке с углеводом цвет меняется из фиолетового на желтый. Реакция
отрицательная, если цвет среды не меняется. При замедленной реакции цвет
среды меняется лишь на 10—14-е сутки.
Определение органолептических показателей бифидобактерий.
Исследуемые штаммы бифидобактерий пересевают с кукурузно-лактозной среды в
количестве 5% на стерильное обезжиренное молрко с 0,5% кукурузного экстракта
и термостатируют при температуре 37±1°С. Полученную закваску используют дл
повторного заквашивания стерильного молока с кукурузным экстрактом,
термостатируют при той же температуре. После сквашивания его охлаждают и
проводят органолептическую оценку.
Определение газообразования бифидобактерий на плотной
питательной среде. Исследуемый штамм бифидобактерий уколом засевают в столбик
с плотной питательной средой для культивирования бифидобактерий, содержащей
1,5—2% агара. Посевы термостатируют при температуре 37±ГС в течение 2—3 дней,
после чего их просматривают.
Штаммы, которые могут быть отнесены к бнфидобактериям, не
должны образовывать газа.- Поэтому в питательной среде по всей линии укола не
должно быть трещин и пузырьков,-газа. Исключение представляют штаммы вида В.
adolescenis, образующие незначительное количество углекислого газа.
Определение образования каталазы. На предметное стекло с
1—2 каплями 3%-ного пероксида водорода вносят 1 колонию штамма
бифидобактерий, выращенного на полужидкой питательной среде. При этом не
должно образовываться пузырьков газа, так как бифидобактерии
каталазоотрицательные.
Определение отношения культур бифидобактерий к желатину.
Способность бифидобактерий не разжижать желатин определяют путем посева
исследуемого штамма в пробирку с любой из питательных сред для
культивирования бифидобактерий, содержащей вместо агара 10% желатина. Посевы
термостатируют при температуре 38±1°С в течение 48 ч. Затем пробирки помещают
на одни сутки в холодильник, после чего просматривают. В посевах.не должно
быть никаких следов разжижения желатина.
|