|
|
Чашечный метод. Сущность метода
заключается в посеве определенного количества исследуемого субстрата или его
разведения в чашки Петри с плотной питательной средой, на которой после
термостатирования (в зависимости от видов организмов) подсчитывают выросшие
колонии (32).
На результат подсчета микроорганизхмов с помощью этого
метода влияет целый ряд факторов: состав и рН питательной среды, температура
и продолжительность термостатирования. Для получения сравнимых результатов
при учете определенных групп микроорганизмов нужно применять среды
стандартного состава.
С помощью этого метода можно подсчитать количество
микроорганизмов различных групп в зависимости от используемых питательных
сред и условий термостатирования.
Исходя из предполагаемой обсемененности исследуемого
продукта, готовят разведения для посевов. При небольшом количестве микробов
(100—300 клеток в 1 мл) исследуемый образец не разводят, а засевают 1 мл
непосредственно в чашку Петри и заливают питательной средой. Если микрофлора
исследуемого материала обильная, то приготавливают разведения, причем
рассчитывают, какое из разведений должно быть последним, чтобы в результате
посева Г мл этого разведения на чашки Петри находились десятки колоний.
Посев делают из определенных разведений в зависимости от
едполагаемого количества микроорганизмов в исследуемом с.убстте. Стерильной
пипеткой наносят определенный овъем (0,05, 0,1 и 0.2 мл) соответствующего
разведения, -предварительно тщательперемешанного, на агаровую поверхность
чашки Петри. Нанесен) пробу распределяют по поверхности среды стерильным
шпатем. Для посевов из разных разведений каждый раз используют вую стерильную
пипетку и новый шпатель. При посеве в агаризонную питательную среду
исследуемые разведения посаё тшатсньго перемешивания по 1 мл засевают в
стерильные чашки Петри, эти же чашки Петри заливают по 12—15 мл (так, чтобы
слой ага' был не менее 3 мм) расплавленного и охлажденного до 45°С питаьного
агара. Сразу же после заливания питательной среды легким качизанием чашки
тщательно смешивают питательную среду с поным материалом, но так, чтобы не
смочить крышку. Затем ча!пки три с посевом ставят на горизонтальную .
поверхность для застыия, после чего помешают их в термостат, подсчитывают
количео колоний, выросших при высеве из определенного разведения на ух
(одной) чашках Петри. Результаты параллельных высевов суммируют и определяют
среднее число колоний, выросших при высеве из этого разведения.
Посев в жидкие среды (метод предельных разведений, метод
титрования). В пробирки (или колбы) с жидкой средой вносят строго
определенный объем из различных разведений исследуемого продукта. После
инкубации регистрируют наличие или отсутствие роста, результаты обрабатывают
статистически с помощью специальной таблицы и затем рассчитывают число
клеток, содержащихся в 1 г (1 мл) исходного субстрата.
Питательную среду, благоприятную для развития учитываемых
микроорганизмов, предварительно разливают в пробирки или колбы и стерилизуют.
Во все пробирки наливают одинаковый объем среды. Посев проводят из нескольких
разведений с таким расчетом, чтобы в опыт попало то разведение, при высеве из
которого рост будет во всех параллельных сосудах, а также то последующее
разведение, которое не даст роста ни в одной из параллельных пробирок,
Каждое разводрние засевают в 2—5 параллельных пробирок,
чиная с большего разведения. Количество посевного материала во х пробирках
одинаково и соответствует 1 мл. После ннокулиания среды пробирки выдерживают
при температуре, благоприюй для роста микроорганизмов. После инкубации
отмечают наличие или отсутствие роста микрганизмов по характерным для данной
группы признакам: внзуно — по свертыванию, кислотообразованию, помутнению,
газообованию ( 33). Затем по таблице Мак-Крэди ( 156), разотанной на
основании методов вариационной статистики, опредет наиболее вероятное
количество микроорганизмов. Рассмотренные методы учета микроорганизмов имеют
свон доипства и недостатки. Так, прн простоте определения и быстром учении
результатов по методу подсчета клеток в счетной камере етоду Брида следует
учесть, что результаты могут иметь завышые значения, так как при этих методах
определяется суммарколичество микробов — и мертвых, н живых. Чашечный метод
отличается от предыдущих длительностью ана, но с помощью этого метода можно
выявить количество жизособных клеток. Метод предельных разведений также
характеется продолжительностью анализа н, кроме того, большим разом
показаний. Но при этом он позволяет определить микробную обсемененность в
больших количествах исследуемого продукта (1 г и болея).
|